Shanghai Kekai Biotechnology Co., Ltd.

Enterokinase recombinante
Alta especificidade e alta pureza
1. Introdução do produto
Enterokinase é uma enterokinase bovina recombinante de alta pureza. A enzima é purificada pelo HPLC, pura, específica e não contém outros proteases. Enterokinase (EC 3.4.21.9) é uma protease específica que corta o terminal carboxyl de lisina contendo quatro ácidos asparticos na frente: ácido aspartic-ácido aspartic-ácido aspartic-ácido aspartic-ácido aspartic-aspartic ácido-aspartic ácido-lisina ácido aspartic. Enterokinase remove proteínas de fusão localizadas no n-terminus de proteínas para remover etiquetas de fusão indesejadas.
Alta especificidade
1) Proteases específicas que cortam os sítios terminais de carboxíl de lisina contendo quatro ácidos aspúricos à frente: ácido aspálico - ácido aspartic - ácido aspartico - ácido aspartico - lisina (DDDDK)
2) Sem outros proteases, nenhum decote não específico
Figura 1: Resultados dos testes SDS-PAGE, uma única faixa principal de enterokinase purificada
Figura 2: 1U de EK é aplicado à análise SDS-PAGE após 0min, 10min, 20min, 30min, 40min, 50min e 60 min de substrato de 50ug
Figura 3: 1U, 2U, 5U, 10U EK atuando em substrato 50ug após 4h e 1U EK atuando na análise SDS-PAGE após 50ug substrato 16h

Condições de digestão:
De acordo com a definição de atividade enzimante, as condições de digestão EK recombinantes são exemplos: No sistema Tris-HCl 8.0 de 25mM:
Concentração de proteína de fusão 0,1-1mg/ml (proteína total 50-100μg)
Dosagem EK recombinante 1-2U
Temperatura de 25°C
A digestão durante a noite, ou digestão completa, leva 12h-16h.

Fatores comuns que afetam a atividade de enterokinase
Em > imidazol de 200 mM, ou > 200 mMNaCl, ou > 5% de glicerol, o efeito de digestão é afetado. A digestão enzimática pode ser realizada de acordo com os seguintes métodos recomendados:
1) Para obter os resultados de digestão ideais, dilante a amostra em 25 mM Tris-HCl 8.0 tampão antes da digestão.
2) Se a diálise for inconveniente, a amostra pode ser diluída, o teor de imidazol está abaixo de 100mM, a concentração de NaCl é inferior a 50mM, e a concentração de glicerol é inferior a 5% para digestão enzimática, e a razão de dosagem enzimática para proteína permanece inalterada (ou seja, 50μg de proteína é digerida em 1U).
3) Se a solução amostral contiver um ou mais dos componentes acima, e for inconveniente remover, neste momento, aumentar adequadamente a quantidade de enzima ou prolongar o tempo de digestão, e também pode obter um melhor efeito de digestão.

3. Uso do produto
Usado para remover proteínas de fusão localizadas no n-terminus de proteínas para remover etiquetas de fusão indesejadas

Modelo:KK-T008
9014-74-8
EC:3.4.21.9
Nome da empresa: Shanghai Kekai Biotechnology Co., Ltd